Качественные реакции на углеводы. Ход работы.
Реакция Троммера.
В 5 пробирок наливают по 1 мл 1% раствора глюкозы, фруктозы, ксилозы, мальтозы, сахарозы и в каждую добавляют по 1 мл раствора гидроксида натрия. К смеси прибавляют по каплям 5% -ный раствор сульфата меди, постоянно встряхивая, до появления неисчезающего осадка гидроксида меди (И). Осторожно нагревают верхнюю часть содержимого пробирки на газовой горелке. Появляется желтое окрашивание (гидроксид меди (I)), переходящее в красное (оксид меди (1)), что указывает на положительную реакцию Троммера.
Реакция с уксусной медью.
В четыре пробирки берут по 1 мл глюкозы, ксилозы, мальтозы, сахарозы и добавляют по 1 мл двойной смеси уксусной меди и натрия. Осторожно нагревают верхнюю часть содержимого пробирки на газовой горелке. Появляется желтое окрашивание, (гидроксид меди (I)), переходящее в красное окрашивание (оксид меди (I)).
Реакция с фениягидразином.
В сухую пробирку добавляют 3-5 мг фенилгидразина и по каплям насыщенный раствор уксуснокислого натрия до полного растворения осадка (избегать излишка уксуснокислого натрия). Затем добавляют 5% - ный раствор глюкозы - половину от общего объема. Вначале пробирки помещают на 45 минут в водяную башо, затем - в стакан со льдом. Образующиеся кристаллы рассматривают в микроскоп.
Реакция Молиша.
Качественной реакцией на углеводы является реакция с а-нафтолом. Испытуемое вещество в твердом виде или в растворе должно быть свободно от волокон фильтровальной бумаги.
В пробирку набирают 1 мл раствора углевода и добавляют 5 капель раствора а-нафтола. Взбалтывают, затем по стенкам пробирки осторожно добавляют 1 мл концентрированной серной кислоты. Серная кислота оседает на дно пробирки и на границе двух жидкостей образуется кольцо красно - фиолетового цвета.
Реакция Селиванова на кетозы.
В две пробирки наливают по 3 мл реактива Селиванова, в одну из них прибавляют 3 капли раствора фруктозы, в другую 3 капли раствора глюкозы. Обе пробирки помещают на 8 минут в водяную башо при температуре 80°С до изменения окраски. В пробирке с фруктозой появляется красное окрашивание.
Обнаружение крахмала.
К 2 мл раствора крахмала прибавляют 2-3 капли раствора Люголя. Раствор окрашивается в синий цвет. Содержимое пробирки делят на 2 части: к первой части прибавляют 1-2 мл 10%-ного раствора гидроксида натрия, вторую часть содержимого нагревают. Во всех случаях окраска исчезает, причем во второй пробе окраска вновь появляется при охлаждении. Реакция основана на образовании соединения йода с амилазой.
Кислотный гидролиз олиго- и полисахаридов.
В три пробирки наливают по 3 мл 0,1 % раствора сахарозы, мальтозы и крахмала. В каждую пробирку добавляют 2-3 капли концентрированной НС1 и на 15 минут помещают их в кипящую водяную баню, затем в каждую пробирку добавляют по 2 мл 10% раствора NaOH и 6 капель 5% раствора CuSC>4. При нагревании появляется осадок красного цвета.
Оборудование и реактивы:
- Пипетки градуированные на 1-2 мл;
- бюретка градуированная на 25 мл;
- баня водяная и со льдом;
- микроскоп;
- 0,1%-ный раствор глюкозы, фруктозы, мальтозы, сахарозы;
- 1%-ный раствор крахмала,
- 5%-ный сульфата меди, 10%-ный гидроксида натрия, 0,2%-ный анафтола в этиловом спирте, насыщенный ацетат Na, 1%-ная уксусная кислота, двойной состав 5% уксуснокислой меди и натрия (5 г ацетата меди и 5 г ацетата натрия растворяют в 100 мл раствора уксусной кислоты), концентрированная серная и хлорная кислота;
- фенил гидразин;
- реактив Люголя (1 г йода и 2,5 г йодированного калия растворяют в 20 мл дистиллированной воды);
- реактив Селиванова (0,05 г резорцина растворяют в 100 мл 18% раствора хлорной кислоты);
- раствор орицина (0,2 г орицина растворяют в 100 мл 30% раствора хлорной кислоты, содержащей 0,1 г хлорного железа).
