Газометрический метод определения активности пероксидазы.

Пероксидазы катализируют окисление органических соединении в растительной клетке (полифенолов, ароматических аминов и др.) с помощью пероксида водорода. С перок-сидом водорода пероксидаза образует комплексное соединение, в результате чего пероксид активируется и приобретает способность действовать в качестве акцептора водорода.

AH₂ + H₂O₂ → 2H₂O + A

где АH₂ - субстрат.

Активность пероксидазы определяется по скорости выделения кислорода. Прибор для определения активности пероксидазы состоит из закрепленной в штативе бюретки, к нижнему концу которой резиновой трубкой присоединена стеклянная груша, а на верхний конец надета пробка с тройником. Один конец тройника резиновой трубкой соединен с колбой на 50 мл, второй закрыт винтовым зажимом. Груша фиксируется на штативе в кольце. Бюретка и груша заполнены подкрашенной водой. Груша служит для установления уровня воды в бюретке на 0 (рисунок 9).

Ход работы

Навеску растительной ткани (0,2-0,3 г) растирать в фарфоровой ступке в течение 3 минут с 2-Змл буферного раствора с рН = 6,2. Растертый материал перенести в большое колено каталазника, ступку несколько раз промыть буферным раствором с рН=6,2 (объем буферного раствора - до 13мл).

В малое колено каталазника поместить 2 мл 1,5% раствора Н₂О₂ и 2 мл 2,5% раствора пирогалола.

Соединить колбу с прибором, открыть зажим и перемещением груши установить уровень воды в бюретке на 0, затем закрыть зажим.

Перевернуть пробирку в колбе так, чтобы Н₂O₂ попала на навеску и, встряхивая колбу, отмечать каждую минуту уровень воды в бюретке (он снижается за счет давления кислорода). Во время отсчета уровень воды в груше и бюретке выравнивают. Определение проводят в течение 15 минут с интервалом в 3 минуты

Опыт проводится по изложенной выше методике.

Результаты опыта можно выразить в см³ О₂/100 г растительной ткани/ 15 минут и занести в таблицу:

Прибор для определения активности каталазы - каталазник.

Оборудование и реактивы:

• Ступки,
• растительное сырье (картофель, морковь и др.),
• прибор для определения активности каталазы (каталазник),
• СаСО₃, 3%-ный раствор Н₂O₂.

Вопросы для повторения:

• Какими методами определяется активность пероксидазы?

• Метод определения покрытия — измерение суммарной длины отрезков, образуемых при пересечении растений
• Методы определения различных форм азота
• Предложены три метода определения фитомассы подземных органов
• Атмосферный воздух. Основные понятия, определения и характеристики
• Борьба с вредителями культурных растений - химические методы, подразделение пестицидов
• Главный недостаток регрессионного метода оценки
• Диаллельный анализ как метод подбора исходного материала в селекции растений (на примере томата)
• Дозирование белков биуретовым методом
• Искусственный мутагенез арсенал методов селекции
• Локальные методы охраны окружающей среды
• Массовое развитие высших водных растений в водоемах, методы ограничения их численности
• Метод без площадочного учета, в четности методам, приспособленным к лесной растительности
• Метод окрашивания фуксином (метод Иванова И.)
• Методика анализа данных по сообществам на сопряженность между видами - Данные Гудолла
• Методика культивирования дождевых червей по Баррету