Газометрический метод определения активности пероксидазы.

Пероксидазы катализируют окисление органических соединении в растительной клетке (полифенолов, ароматических аминов и др.) с помощью пероксида водорода. С перок-сидом водорода пероксидаза образует комплексное соединение, в результате чего пероксид активируется и приобретает способность действовать в качестве акцептора водорода.

где АИ.2 - субстрат.

Активность пероксидазы определяется по скорости выделения кислорода. Прибор для определения активности пероксидазы состоит из закрепленной в штативе бюретки, к нижнему концу которой резиновой трубкой присоединена стеклянная груша, а на верхний конец надета пробка с тройником. Один конец тройника резиновой трубкой соединен с колбой на 50 мл, второй закрыт винтовым зажимом. Груша фиксируется на штативе в кольце. Бюретка и груша заполнены подкрашенной водой. Груша служит для установления уровня воды в бюретке на 0 (рис. 9).

Ход работы

Навеску растительной ткани (0,2-0,3 г) растирать в фарфоровой ступке в течение 3 мин. с 2-Змл буферного раствора с рН = 6,2. Растертый материал перенести в большое колено ка- талазника, ступку несколько раз промыть буферным раствором с рН=6,2 (объем буферного раствора - до 13мл).

В малое колено каталазника поместить 2 мл 1,5% раствора Н2О2 и 2 мл 2,5% раствора пирогалола.

Соединить колбу с прибором, открыть зажим и перемещением груши установить уровень воды в бюретке на 0, затем закрыть зажим.

Перевернуть пробирку в колбе так, чтобы Н202 попала на навеску и, встряхивая колбу, отмечать каждую минуту уровень воды в бюретке (он снижается за счет давления кислорода). Во время отсчета уровень воды в груше и бюретке выравнивают. Определение проводят в течение 15 мин с интервалом в 3 мин.

Опыт проводится по изложенной выше методике.

Прибор для газометрического определения каталазы

Результаты опыта можно выразить в см3 02/100 г растительной ткани/ 15 мин. и занести в таблицу:

Виды растений

Навеска, г

Объем выделившегося кислорода (мл) в течение

Активность пе- роксидазы

3 мин.

6 мин.

9 мин.

12 мин.

15 мин.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

прибор для определения активности каталазы - каталазник

Оборудование и реактивы:

Ступки, растительное сырье (картофель, морковь и др.), прибор для определения активности каталазы (каталазник), СаСОз, 3%-ный раствор Hj02.

Вопросы для повторения:

  • Какими методами определяется активность пероксидазы?
Поделиться:
Добавить комментарий