Дозирование белков биуретовым методом.
Метод основан на образовании в щелочной среде соединения фиолетового цвета. Интенсивность окрашивания прямо пропорциональна концентрации белка в, пределах 2- 10 мг белка в пробе.
Ход работы
К 1 мл разбавленного белка прибавляют 4 мл биуретного реактива, хорошо перемешивают и определяют оптическую плотность на фотоколориметре. Содержание белка в исследуемом материале рассчитывают по калибровочной кривой, в процентах, с учетом разведения.
Оборудование и реактивы:
Раствор растительного белка разбавляют 5 %-ным раствором NaCl, а - нафтолом, так, чтобы содержание белка было в пределах 1-10 мг/мл.
Термины.
Амилаза - фермент, под действием которого в растениях происходит расщепление крахмала. При этом образуются декстрины и мальтоза. Обнаружены три амилазы: а-амилаза, Р-амилаза и глюкоамилаза. Амилазы отличаются между собой по своему действию на крахмал и распространению в природе. При одновременном действии а- и р-амилазы крахмал гидролизуется на 95%.
Жирные кислоты - карбоксильные кислоты, входящие в состав лигшдов. Жирные кислоты бывают насыщенными и ненасыщенными. В растениях чаще всего присутствуют ненасыщенные жирные кислоты: олеиновая (80% в семенах масличных растений), линолевая и пальметиновая.
Крахмал - полисахарид, откладывающийся в виде зерен в клубнях, корнях и семенах растений. Содержание его в пшенице - 75%, кукурузе - 72%, рисе - 80%, картофеле - 12-14%. Крахмальные зерна состоят из амилозы (растворенная внутренняя часть - 20%) и амилопектина (труднорастворимая часть -80%), отличающихся по структуре и свойствам в зависимости от вида растений и условий среды.
Белки - макромолекулярные органические вещества, состоящие из аминокислот, соединенных пептидными связями. Они играют основную роль в жизни всех живых организмов. Выполняют как структурную, гак и запасную функцию.
Гемицеллюлоза - полисахарид, который не растворяется в воде, но растворяется в щелочах. Больше всего гемицеллю- лозы в древесной части растения, в соломе, семенах, орехах, кукурузных початках, отрубях и др. При кислотном гидролизе образуются манозы, галактозы, арабинозы, ксилозы.
Жиры - растительные масла, запасные вещества которых откладываются в больших количествах в семенах и фруктах. Так, соя содержит 20% жиров, подсолнечник - 24- 48%, клещевина - 60%, хлопок - 23%, кукуруза - 5%, горох, фасоль - 2%. По химической природе жиры представляют собой сложные эфиры глицерина и жирных кислот.
Запасные вещества - химические соединения, откладывающиеся в растительных клетках в качестве запасных веществ. Они не участвуют в физиологических процессах, но используются по мере необходимости. К запасным веществам относятся углеводы, белки и жиры. По количеству содержания запасных веществ растения делятся на 3 группы: масличные, крахмальные и белковые.
Липазы - ферменты, способствующие гидролизу жиров с образованием глицерина и жирных кислот.
Углеводы - соединения, состоящие из углерода, водорода и кислорода. По химической природе углеводы - это альдегиды и кетоны многоатомных спиртов, имеющие большое биологическое значение. Синтезируются в процессе фотосинтеза и являются промежуточными продуктами многих метаболитических процессов. Углеводы входят в состав структурных соединений растительной клетки. Они делятся на моносахариды (глюкоза, фруктоза), олигосаха- риды (сахароза, мальтоза, лактоза) и полисахариды (крахмал, целлюлоза).