Методы определения различных форм азота.

Растения поглощают минеральные формы азота в виде анионов NO3". В митохондриях или хлоропластах (нитратный фотосинтез) имеет место превращение нитратных форм азота в NO~2 и аммонийную форму NH4+. Данные соединения азота уже в корнях растений участвуют в синтезе аминокислот, которые транспортируются в надземные органы и используются для синтеза белков и других азотсодержащих веществ.

Ход работы

L Первый метод определения нитратного азота

Для определения нитратного азота необходим различный растительный материал: листья на разных фазах онтогенеза, овощи, фрукты.

Определение нитратного азота основывается на реакции ионов N03~ с дифениламином в присутствии кислорода. Происходит окисление дифениламина.

В фарфоровой ступке исследуемый растительный материал растирают до появления сока и добавляют 1-2 капли 1% раствора дифениламина. Спустя 6-10 сек. появляется синее окрашивание, что указывает на присутствие N03~.

Существует шкала, по которой определяют наличие нитратного азота в растительном материале (от 0 до 5 баллов).

2. Второй метод определения нитратного азота

Взять 5-10 г растительного материала, измельчить, перенести в пробирку, добавить 10 мл дистиллированной воды и кипятить 3-5 мин. Затем взять 1-2 мл экстракта и добавить 1 мл концентрированной H2SO4 , причем так, чтобы кончик пипетки был в середине экстракта. Идет разделение раствора. Затем добавить 1 мл 1% раствора дифениламина. На линии контакта появляется голубой или оранжевый цвет, что позволяет установить наличие нитратов.

Определение аммонийной формы азота.

В колбу на 50 мл поместить несколько граммов исследуемого материала, содержащего большое количество азота в форме аммония (свекла, капуста) и добавить 25-30 мл 10% раствора КОН или NaOH. Закрыть колбу резиновой пробкой со стеклянной трубочкой, кончик которой вставлен в пробирку с 1% фенолфталеином, и осторожно нагревать „

В результате выделяемый NH4+ изменяет цвет фенолфталеина до розового или слаборозового оттенка в зависимости от количества аммонийного азота в образце.

Определение амидной формы азота

Аспарагин (амид аспарагиновой кислоты) в больших количествах содержится в проростках. Этиолированные проростки бобовых длиной 10-12 см содержат до 20 % ас- парагина от сухой массы.

Растереть в ступке 60 г этиолированных проростков, через бинт отжать в пробирку сок. Для отделения белков пробирку с соком ставят на водяную баню (100°С), затем содержимое фильтруют.

В пробирку берут 5 мл фильтрата, приливают 25 мл спирта и оставляют минут на 5, после чего 1-2 капли раствора исследуют под микроскопом.

Зарисовать кристаллы аспарагина и сделать выводы.

Оборудование и реактивы:

Различный растительный материал, этиолированные проростки, ступки, пестики, водяная баня, 1% раствор дифениламина, концентрированная H2S04, 10% раствор КОН, 1% раствор фенолфталеина, этиловый спирт.

Поделиться:
Добавить комментарий