Гидролиз крахмала под действием амилазы.

Крахмал представляет собой полисахарид, состоящий из линейной амилозы и разветвленного амилопектина, с эмпирической формулой (СбНюОб) • п. Крахмал накапливается в семенах, клубнях, корневищах и т. д. Крахмал нерастворим в воде. Расщепление крахмала в растениях происходит под действием а- и Р-амилазы, при этом он гидролизуется до мальтозы, а затем до двух молекул глюкозы.

Схематически этот процесс можно представить следующим образом:

Ход работы

Для приготовления солодовой вытяжки необходимо поместить в колбу 5 - 10 г солода (проросшие семена ячменя), добавить 50 мл теплой воды (35 - 40°С), затем 1-2 мл глицерина для ускорения извлечения фермента, все перемешать и настаивать не менее получаса, периодически помешивая, затем содержимое профильтровать через складчатый фильтр. Фильтрат содержит активную амилазу.

Затем приготовить 12 пробирок, расставленных в 2 ряда, с 5 мл слабого раствора Люголя.

Нагреть водяную баню до температуры 45°С (можно использовать колбу с водой нужной температуры) и приступить к опыту. Налить в 2 чистые пробирки по 10 мл 2% крахмального клейстера и по 1 мл солодовой вытяжки, взболтать. Немедленно набрать пипетками из этих пробирок по 0,5 мл жидкости и внести в первую пару пробирок с раствором йода, после чего одну пробирку с крахмалом и солодовой вытяжкой (вместе с пипеткой) поместить в водяную баню (в колбу с водой 45°С), а другую установить в штативе. Через две минуты влить по 0,5 мл жидкости во вторую пару пробирок с растворами йода, еще через 2 мин - в третью пару и т.д. В зависимости от активности фермента интервал между взятием проб может быть изменен, важно только, чтобы пробы из обеих пробирок брались одновременно.

Результаты записать в таблицу, указав в соответствующей графе окраску раствора крахмала.

 

Время гидролиза (мин.)

0

2

4

6

 

24

+ 19 °С

синий

 

 

 

 

 

+ 45 °С

синий

 

 

 

 

 

Сформулировать выводы о влиянии температуры па активность амилазы.

Оборудование и реактивы:

Размолотый солод, фарфоровые ступки, электроплитка, пробирки, пипетки на 1 и 2 мл, складчатые фильтры, дистиллированная вода, конические колбы па 50 - 100 мл, водяная баня, раствор Люголя, воронки.

Вопросы для повторения:

  • Какова роль крахмала для растений?
  • Какие вещества называются запасными и какие конституционными. Какова их роль?
  • К какому классу ферментов относятся а - и р - амилаза?
  • Какие условия являются оптимальными для активации данных ферментов?
  • Почему ферменты выделяются из проросших семян?
Поделиться:
Добавить комментарий