Гидролиз крахмала под действием амилазы.
Крахмал представляет собой полисахарид, состоящий из линейной амилозы и разветвленного амилопектина, с эмпирической формулой (С6Н10О5) • n. Крахмал накапливается в семенах, клубнях, корневищах и т. д. Крахмал нерастворим в воде. Расщепление крахмала в растениях происходит под действием α- и β-амилазы, при этом он гидролизуется до мальтозы, а затем до двух молекул глюкозы.
Схематически этот процесс можно представить следующим образом:
Ход работы
Для приготовления солодовой вытяжки необходимо поместить в колбу 5 - 10 г солода (проросшие семена ячменя), добавить 50 мл теплой воды (35 - 40°С), затем 1-2 мл глицерина для ускорения извлечения фермента, все перемешать и настаивать не менее получаса, периодически помешивая, затем содержимое профильтровать через складчатый фильтр. Фильтрат содержит активную амилазу.
Затем приготовить 12 пробирок, расставленных в 2 ряда, с 5 мл слабого раствора Люголя.
Нагреть водяную баню до температуры 45°С (можно использовать колбу с водой нужной температуры) и приступить к опыту. Налить в 2 чистые пробирки по 10 мл 2% крахмального клейстера и по 1 мл солодовой вытяжки, взболтать. Немедленно набрать пипетками из этих пробирок по 0,5 мл жидкости и внести в первую пару пробирок с раствором йода, после чего одну пробирку с крахмалом и солодовой вытяжкой (вместе с пипеткой) поместить в водяную баню (в колбу с водой 45°С), а другую установить в штативе. Через две минуты влить по 0,5 мл жидкости во вторую пару пробирок с растворами йода, еще через 2 мин - в третью пару и т.д. В зависимости от активности фермента интервал между взятием проб может быть изменен, важно только, чтобы пробы из обеих пробирок брались одновременно.
Результаты записать в таблицу, указав в соответствующей графе окраску раствора крахмала.
|
|
Время гидролиза (минут) |
|||||
|
t° |
0 |
2 |
4 |
6 |
... |
24 |
|
+ 19 °C |
синий |
|
|
|
|
|
|
+ 45 °C |
синий |
|
|
|
|
|
Сформулировать выводы о влиянии температуры па активность амилазы.
Оборудование и реактивы:
- Размолотый солод,
- фарфоровые ступки,
- электроплитка,
- пробирки,
- пипетки на 1 и 2 мл,
- складчатые фильтры,
- дистиллированная вода,
- конические колбы па 50 - 100 мл,
- водяная баня,
- раствор Люголя,
- воронки.
Вопросы для повторения:
- Какова роль крахмала для растений?
- Какие вещества называются запасными и какие конституционными. Какова их роль?
- К какому классу ферментов относятся α- и β - амилаза?
- Какие условия являются оптимальными для активации данных ферментов?
- Почему ферменты выделяются из проросших семян?
