Редукция днк в хромосомах — ламповых щетках.

Вопрос о наличии ДНК в хромосомах — ламповых щетках имеет длинную историю. С тех пор как А. Маршак и С. Маршак выступили с сенсационным сообщением об отсутствии ДНК в ядрах развивающихся половых клеток, появилось немало заявлений о наличии ДНК в этом объекте в замаскированной форме, а также о возможности открытия ДНК в ядрах ооцитов после центрифугирования, когда ДНК конденсируется в более узком пространстве, где его нетрудно открыть с помощью реакции Фельгена. Однако за немногими исключениями все эти заявления опирались ие столько на конкретный структурный цитохимический анализ с помощью современных средств исследования, сколько на убежденность современных биологов в том, что синтез рибосомных полимеров (белкого компонента и РНК) в хромосомах — ламповых щетках, как и во всех других обследованных объектах, возможен только на основе транскрипции с ДНК. Между тем в мировой литературе после выступления супругов Маршак и разъяснений, данных биохимиками и цитологами, включая реплику Браше [1960], не появлялось ни одной убедительной работы, демонстрирующей с помощью современных методов наличие ДНК в дефинитивных хромосомах — ламповых- щетках (а также и в других объектах этого ряда).

В известных обзорах и монографиях, где обсуждается этот вопрос, приводятся заявления биохимиков и цитологов (в первую очередь Браше) и не представляется достаточно убедительных доказательств наличия ДНК в хромосомах — ламповых щетках. Данные Изава и соавторов по определению ДНК в хромосомах — ламповых щетках тритона не решили вопроса, так как ДНК определялась по принципу разрушения ДНК- азота, а не прямым способом. Ни одному исследователю не удавалось выявить синтез ДНК в хромосомах — ламповых щетках с помощью радиоавтографического метода, хотя синтез РНК и белков с помощью меченых предшественников выявляется с полной очевидностью. Никому не удалось достаточно убедительно показать распыление ДНК по широкой площади срезов ядер ооцитов с хромосомами — ламповыми щетками посредством цитофотомет- рического метода. Не убеждают в этом и данные, полученные с помощью центрифугирования и последующей реакции Фельгена по методу Браше.

Причина трудностей с выявлением ДНК в хромосомах — ламповых щетках заключается, по-видимому, в том, что процесс репликации ДНК на определенном этапе развития ооцитов прекращается и в хромосомах остаются только белок и РНК, т. е. в основном рибосомный материал, маскирующий остаточную, бездействующую нить ДНК.

Общеизвестно, что наиболее достоверными методами — реакцией Фельгена и радиоавтографическими тестами на включение предшественников ДНК в хромосомах — ламповых щетках не обнаруживается. Можно представить себе, что минимальное для диплоидной клетки количество ДНК пребывает в растущем ооци- те без репликации, по которой ее выявляют с помощью радиоавтографии. Однако трудно допустить, что рост ооцита, сопровождающийся исключительно высоким темпом синтеза РНК и формирования белковых структур, мог быть обеспечен на всем протяжении формирования дефинитивного ооцита бессменными материалами ДНК. Следы ДНК в виде волокнистого компонента, связывающего рибосомный материал в форме известной конструкции хромосом — ламповых щеток, вероятно, сохраняются в хромосомах, но, очевидно, совсем в другом виде по сравнению с типичной конструкцией хромосом. Скорее всего, этот сохраняющийся в хромосомах минимум ДНК принадлежит факторам менделевской наследственности, наличие которых в женской половой клетке доказывается генетическими методами. Что же касается синтеза рибосомальной РНК, то логичнее допустить, что он осуществляется в растущем ооците путем саморепликации (т. е. по способу РНК->РНК), скорость которой, очевидно, превышает типичный путь репликации — транскрипции (ДНК->-ДНК->-РНК).

Попытки выявления ДНК с помощью наиболее совершенных методов в хромосомах — ламповых щетках продолжаются и по настоящее время с переменным успехом. Еще в 1965 г. был использован метод флуоресцентно-микроскопического определения ДНК б хромосомах — ламповых щетках с помощью реакции на псевдо-изоцианин, превосходящей по чувствительности метод Фельгена [Sterba, Schaffner, 1965]. Однако при испытании этого метода на различных объектах выяснилось, что ДНК в хромосомах — ламповых щетках обнаруживается не во всех случаях. Так, например, в ооцитах карповых рыб ДНК в хромосомах — ламповых щетках не удается выявить ни с помощью реакции Фельгена, ни при применении псевдоизоцианинового метода. Между тем, по данным этого автора, в ядрышках ооцитов интенсивно включаются предшественники РНК, обнаруживаемые с помощью радиоактивной метки. Трудно представить себе возможность активной транскрипции РНК на молекулах ДНК, не подвергающихся самообновлению (редупликации) на протяжении длительного срока функционирования хромосом — ламповых щеток.

Не появлялось в литературе и попыток разобраться в динамике постепенного уменьшения количества ДНК в растущих ооцитах с помощью реакции Фельгена.

По-видимому, этот процесс осуществляется с различной скоростью у разных видов. В обследованных нами объектах, даже принадлежащих к одной группе животных, падение содержания ДНК, обнаруживаемое с помощью реакции Фельгена, происходит совершенно по-разному у разных представителей группы. В растущих ооцитах рака фельген-пози- тивные участки в хромосомах — ламповых щетках сохраняются, когда ооцит достигает довольно крупных размеров. На этом этапе, очевидно , значительное количество ДНК можно открыть в ооцитах после центрифугирования по Браше. Однако дефинитивный ооцит, достигший максимальных размеров, полностью лишен фельген-позитивных участков в хромосомах — ламповых щетках, которые дают выраженные реакции только на белок (окраска светлым зеленым) и на РНК (окраска пиронином). В таких случаях, естественно, предварительное центрифугирование не даст никакого преимущества в выявлении ДНК реакцией Фельгена.

У других обследованных нами видов десятиногих раков — креветок и крабов — наблюдается значительно более стремительное падение содержания фельген-позитивного материала в хромосомах — ламповых щетках. У северной креветки (Sclerocrangon bо- realis) фельген-позитивный материал в хромосомах — ламповых щетках сохраняется только в участках, прилежащих к ядерной мембране, и только до увеличения диаметра ядра вдвое против лептотенной стадии. В более крупных ядрах ДНК-позитивный материал не открывается. Сходный тип развития ядер ооцитов у травяного краба (Caricnus maenas).

Поделиться:
Добавить комментарий