Определение активности каталазы (по Баху и Опарину)
Ход работы — получение вытяжки фермента
10 граммов картофеля растереть в ступке до однородной массы, которую затем водой перенести в колбу на 200 мл.
Общее количество воды - 80 мл. Полученную смесь в течение 30 минут постоянно встряхивать, а затем профильтровать через складчатый фильтр.
Определение активности фермента
В две колбы на 100 мл прилить по 20 мл вытяжки фермента. Одну колбу кипятить в течение 5 минут с целью инактивации фермента (контроль), затем охладить. В обе колбы прибавить по 20 мл воды и 3 мл 1%-ного раствора Н2О2 и оставить на 20 мин., затем в обе колбы прилить по 5 мл 10%-ного раствора серной кислоты (инактивация фермента). Обе колбы оттитровать раствором KMnO4 0,1 н до появления розовой окраски, исчезающей в течение 30 секунд.
Активность каталазы выражается в мл KMnO4 ОД н и представляет собой разность между титрованием контрольной и опытной колбы (а).
где:
а - количество мл KMnO4 0,1 н и выражается в разности между титрованием контрольной и опытной колбы:
80 - объем воды, которую использовали для экстракции фермента (мл);
20 - объем вытяжки пигмента (мл);
10 - масса исследуемого материала (г).
Оборудование и реактивы:
- Картофель,
- ступки,
- колбы на 200 мл,
- воронки с фильтром,
- цилиндры мерные на 50 мл,
- пипетки на 5-10 мл,
- бюретки на 25 мл,
- H2SO4 10%-ный,
- KMnO4 0,1 н,
- Н2О2 1%-ный раствор.
Вопросы для повторения:
- К какому классу ферментов относится каталаза?
- Какую роль играет каталаза в процессе дыхания?
- Почему у проросших семян активность каталазы выше, чем у сухих?
