Определение активности каталазы (по Баху и Опарину)

Ход работы - получение вытяжки фермента

10 граммов картофеля растереть в ступке до однородной массы, которую затем водой перенести в колбу на 200 мл.

Общее количество воды - 80 мл. Полученную смесь в течение 30 минут постоянно встряхивать, а затем профильтровать через складчатый фильтр.

Определение активности фермента

В две колбы на ] 00 мл прилить по 20 мл вытяжки фермента. Одну колбу кипятить в течение 5 минут с целью инактивации фермента (контроль), затем охладить. В обе колбы прибавить по 20 мл воды и 3 мл 1%-ного раствора Н2О2 и оставить на 20 мин., затем в обе колбы прилить по 5 мл 10%-ного раствора серной кислоты (инактивация фермента). Обе колбы оттитровать раствором КМПО4 0,1 н до появления розовой окраски, исчезающей в течение 30 секунд.

Активность каталазы выражается в мл КМПО4 ОД н и представляет собой разность между титрованием контрольной и опытной колбы (а).

где:

а - количество мл Кмп04 0,1 н и выражается в разности между

титрованием контрольной и опытной колбы:

80 - объем воды, которую использовали для экстракции ферменга (мл);

20 - объем вытяжки пигмента (мл);

10 - масса исследуемого материала (г).

Оборудование и реактивы:

Картофель, ступки, колбы на 200 мл, воронки с фильтром, цилиндры мерные на50 мл, пипетки на 5-10 мл, бюретки на 25 мл,1%-ный раствор.

Вопросы для повторения:
  • К какому классу ферментов относится каталаза?
  • Какую роль играет каталаза в процессе дыхания?
  • Почему у проросших семян активность каталазы выше, чем у сухих?
Поделиться:
Добавить комментарий