Построение калибровочной кривой для количественного определения белка по биурету.
Ход работы
В шесть пробирок ввести соответствующий объем жидкости, указанный в таблице, постоянно взбалтывая раствор. По истечении 30 минут определить оптическую плотность на КФК - 3 при длине волны 540 нм. Полученные результаты используют для построения калибровочной кривой: на оси абсцисс отмечают содержание белка (мг/мл), на оси ординат - оптическую плотность.
№ | Количество белковой смеси St (мл) | Дистиллированная, вода (мл) | Реактив биурет (мл) | Содержание белка (мг/мл) | Оптическая плотность |
1 | 0,2 | 0.8 | 4 | 2 |
|
2 | 0,4 | 0,6 | 4 | 4 |
|
3 | 0,6 | 0,4 | 4 | 6 |
|
4 | 0,8 | 0,2 | 4 | 8 |
|
5 | 1,0 | 0,0 | 4 | 10 |
|
6 | 0 (контр.) | 1,0 | 4 | 0 |
|
Оборудование и реактивы:
- КФК - 3;
- штатив с пробирками;
- пипетки градуированные на 1-2 мл; микробюретки;
- баллон с кислотой на 11;
Смеси: 10% гидроокись Na, которая не содержит карбоната Na (75% смесь гидроокиси Na, в ней карбонаты не растворяются, растворяется дистиллированной водой до 10% концентрации), реактив биурет (к 250 г дистиллированной воды добавляют 0,75 г сульфата меди и 3 г сегнетовой соли - нитрат Na - К, затем хорошо взбалтывают и добавляют 150 мл 10%, смеси гидроокиси Na и 1г йода га К. Объем доводят дистиллированной водой до И.
Реактив содержится в полиэтиленовом, сосуде), стандартная смесь содержит 10 мг белка в 1 мл..
