Реакция Р. Хилла - показатель фотохимической активности хлоропластов

Одним из показателей фотохимической активности хлоропластов является реакция Хилла. Она представляет собой комплекс начальных стадий фотосинтеза, обусловленных фотоокислением воды. Фотовосстановление акцепторов сопровождается выделением кислорода:

>

где А- акцептор электронов.

Эта реакция была открыта Робин Хиллом в 1937 г., обнаружившим, что изолированные хлоропласты способны при освещении восстанавливать железо, одновременно выделяя кислород.

В дальнейшем было показано, что хлоропласты могут восстанавливать и другие соединения: окислительно- восстановительные индикаторы, бензохинон, а также естественный акцептор электронов - NADP.

хлоропласты могут восстанавливать и другие соединения

Ход работы

0,5 г свежих листьев растереть в ступке с фосфатным буфером рН 6,5, содержащим 0,08 М КС1. Растертую массу количественно буфером перенести в центрифужную пробирку, центрифугировать 10 минут при 3000 об/минуту. Осадок отбросить, надосадочную жидкость поместить в мерную колбу на 25 мл и буфером довести до метки. Опыт проводить при низких температурах.

2 мл раствора поместить в кювету спектрофотометра, добавить 2 мл раствора акцептора электронов. Определить оптическую плотность по исходному буферу.

В две сухие пробирки налить по 2 мл суспензии и по 2 мл акцептора электронов (феррицианид калия). Одну пробирку выставить на 15мин. на свет, а вторую (контрольную) на 15 минут поместить в темноту.

Через 15 минут определить оптическую плотность контрольной и опытной пробы. Разность между оптической плотностью контрольной и опытной пробы означает фотохимическую активность суспензии (А).

где А- фотосинтетическая активность; D| и D2 - оптические плотности обеих проб; 25 -объем надосадочной жидкости (мл);

Фотосинтетическую активность хлорофиллов определить но формуле:

2 - объем суспензии, взятой для проведения реакции (мл);

ш - масса растительного материала (г);

15 - время экспозиции (мин).

Оборудование и реактивы:

Ступки фарфоровые, весы и разновесы, ножницы, колбы мерные на 25 мл, центрифуга, пипетки на 2 мл, пробирки, феррицианид калия (65мг/1000 мл Н20), фосфатный буфер рН [Na2HP04-2H20 1/15 М (11,876 г/л) 3,5 мл + КН2Р04 1/15 М (9,078 г/л) 6,5 мл, фосфатный буфер: 10 мл буфера + 5,96 KCIJ.

Вопросы для повторения:

  • Почему все работы нужно проводить при пониженных температурах?
  • Какие существуют естественные акцепторы водорода?
Поделиться:
Добавить комментарий