Нашли неточность, аошибку в тексте?

Выделите текст и нажмите
Ctrl + Enter и напишите вашу версию текста.
Спасибо.

Мы бесплатно разместим статьи, тексты, книги, публикации на Эко портале обращайтесь portaleco.ru@gmail.com

 Гидролиз крахмала под действием амилазы. Получение фермента инвертазы и ее действие на сахарозу.
(2 голоса, среднее 4.00 из 5)
Статьи - Физиология растений

Гидролиз крахмала под действием амилазы. Получение фермента инвертазы и ее действие на сахарозу.

Крахмал представляет собой полисахарид, состоящий из линейной амилозы и разветвленного амилопектина, с эмпирической формулой (СбНюОб) • п. Крахмал накапливается в семенах, клубнях, корневищах и т. д. Крахмал нерастворим в воде. Расщепление крахмала в растениях происходит под действием а- и Р-амилазы, при этом он гидролизуется до мальтозы, а затем до двух молекул глюкозы.

Схематически этот процесс можно представить следующим образом:

Iienaiea: C:\WINDOWS\TEMP\FineReader10\media\image104.jpeg

Ход работы

Для приготовления солодовой вытяжки необходимо поместить в колбу 5 - 10 г солода (проросшие семена ячменя), добавить 50 мл теплой воды (35 - 40°С), затем 1-2 мл глицерина для ускорения извлечения фермента, все перемешать и настаивать не менее получаса, периодически помешивая, затем содержимое профильтровать через складчатый фильтр. Фильтрат содержит активную амилазу.

Затем приготовить 12 пробирок, расставленных в 2 ряда, с 5 мл слабого раствора Люголя.

Нагреть водяную баню до температуры 45°С (можно использовать колбу с водой нужной температуры) и приступить к опыту. Налить в 2 чистые пробирки по 10 мл 2% крахмального клейстера и по 1 мл солодовой вытяжки, взболтать. Немедленно набрать пипетками из этих пробирок по 0,5 мл жидкости и внести в первую пару пробирок с раствором йода, после чего одну пробирку с крахмалом и солодовой вытяжкой (вместе с пипеткой) поместить в водяную баню (в колбу с водой 45°С), а другую установить в штативе. Через две минуты влить по 0,5 мл жидкости во вторую пару пробирок с растворами йода, еще через 2 мин - в третью пару и т.д. В зависимости от активности фермента интервал между взятием проб может быть изменен, важно только, чтобы пробы из обеих пробирок брались одновременно.

Результаты записать в таблицу, указав в соответствующей графе окраску раствора крахмала.

 

Зремя гидролиза (мин.)

0

2

4

6

 

24

+ 19 °С

синий

 

 

 

 

 

+ 45 °С

синий

 

 

 

 

 

Сформулировать выводы о влиянии температуры па активность амилазы.

Оборудование и реактивы:

Размолотый солод, фарфоровые ступки, электроплитка, пробирки, пипетки на 1 и 2 мл, складчатые фильтры, дистиллированная вода, конические колбы па 50 - 100 мл, водяная баня, раствор Люголя, воронки.

Вопросы для повторения:

  • Какова роль крахмала для растений?
  • Какие вещества называются запасными и какие конституционными. Какова их роль?
  • К какому классу ферментов относятся а - и р - амилаза?
  • Какие условия являются оптимальными для активации данных ферментов?
  • Почему ферменты выделяются из проросших семян?

Получение фермента инвертазы и ее действие на сахарозу.

Углеводы, или сахара, составляют большой класс веществ и играют важную роль в обмене веществ. Простые углеводы - моносахариды, представляют собой альдегиды или кетоны многоатомных спиртов. Сложные углеводы - дисахариды и полисахариды, при гидролизе распадаются на простые углеводы.

Фермент (3-фруктофуранозидаза (старые названия - сахара- за или инвертаза) катализирует процесс гидролиза сахарозы:

Iienaiea: C:\WINDOWS\TEMP\FineReader10\media\image105.jpeg

Этот фермент содержится в большинстве растений. Весьма активную (3-фруктофуранозидазу содержат клетки дрожжей.

Для изучения влияния внешних условий на активность Р-фруктофуранозидазы проводят следующий опыт: в несколько пробирок помещают одинаковое количество раствора фермента и одинаковое количество сахара и выдерживают пробирки при разных условиях. Через определенное время, равное для всех вариантов, во всех пробирках проводят реакцию с фелинговой жидкостью, которая восстанавливается при кипячении с глюкозой и фруктозой, но не реагирует с сахарозой. По количеству осадка Cu20 судят о количестве образовавшихся при гидролизе сахарозы моносахаридов. Поскольку количество фермента и субстрата (сахарозы) и продолжительность опыта во всех вариантах одинаковы, то количество продуктов реакции фудет характеризовать активность фермента.

Ход работы

Поместить в ступку 5 г сухих дрожжей, добавить кварцевого песка или толченого стекла, 5 мл воды и тщательно растереть. Затем добавить еще 15 мл воды, нагретой до 40°С, и оставить на полчаса, продолжая время от времени растирание. Полученную жидкость отфильтровать дважды через бумажный фильтр. Полученный фильтрат содержит изучаемый нами фермент.

Для анализа приготовить 3 пробирки. В первую добавить 5 мл 20% раствора сахарозы (контроль); во вторую - 5 мл 20% раствора сахарозы и 1 мл фермента; в третью - 5 мл 20% раствора сахарозы и 1 мл предварительно прокипяченного фермента. Все три пробирки поместить в водяную баню на 15-20 мин. при температуре 40°С. В это время происходит гидролиз сахарозы. Чтобы это доказать, готовим три колбы на 60 - 100 мл. Содержимое пробирок переносим в соответствующие колбы. В каждую добавляем по 10-20 мл раствора Фелинга (I) и 10-20 мл раствора Фелинга (П) и кипятим в течение 3 мин.

Сделать выводы относительно каждой пробирки.

Оборудование и реактивы:

Сухие дрожжи; штатив с пробирками; воронка; песок; водяная баня; термомегр; пипетки градуированные на 1-5-10 мл; весы; 20%-ный раствор сахарозы; растворы- Фелинга (I и И).

Ф I - 4%-ый раствор CuS04 • 5Н20

Ф II - 20% C4H406KNa в15%-ном растворе КОН, в соотношении 1:1

Вопросы для повторения:

  • Какова роль углеводов в жизни растений?
  • Каковы оптимальные условия для активности изучаемых ферментов?

Похожие статьи:

Добавить статью в закладки

 
Добавить комментарий


Защитный код
Обновить

Полное или частичное копирование материалов сайта разрешается только при указании активной ссылки на экологический портал!
Материалы размещены и подготовлены для образовательных и некоммерческих целей.
ООО "Новая Экология" © 2010 - 2017