Нашли неточность, аошибку в тексте?

Выделите текст и нажмите
Ctrl + Enter и напишите вашу версию текста.
Спасибо.

Мы бесплатно разместим статьи, тексты, книги, публикации на Эко портале обращайтесь portaleco.ru@gmail.com

 Газометрический метод определения активности пероксидазы. Определение содержания аскорбиновой кислоты в растениях.
(2 голоса, среднее 4.50 из 5)
Статьи - Физиология растений

Газометрический метод определения активности пероксидазы. Определение содержания аскорбиновой кислоты в растениях.

Пероксидазы катализируют окисление органических соединении в растительной клетке (полифенолов, ароматических аминов и др.) с помощью пероксида водорода. С перок- сидом водорода пероксидаза образует комплексное соединение, в результате чего пероксид активируется и приобретает способность действовать в качестве акцептора водорода.

Iienaiea: C:\WINDOWS\TEMP\FineReader10\media\image60.jpeg

где АИ.2 - субстрат.

Активность пероксидазы определяется по скорости выделения кислорода. Прибор для определения активности пероксидазы состоит из закрепленной в штативе бюретки, к нижнему концу которой резиновой трубкой присоединена стеклянная груша, а на верхний конец надета пробка с тройником. Один конец тройника резиновой трубкой соединен с колбой на 50 мл, второй закрыт винтовым зажимом. Груша фиксируется на штативе в кольце. Бюретка и груша заполнены подкрашенной водой. Груша служит для установления уровня воды в бюретке на 0 (рис.9).

Ход работы

Навеску растительной ткани (0,2-0,3 г) растирать в фарфоровой ступке в течение 3 мин. с 2-Змл буферного раствора с рН = 6,2. Растертый материал перенести в большое колено ка- талазника, ступку несколько раз промыть буферным раствором с рН=6,2 (объем буферного раствора - до 13мл).

В малое колено каталазника поместить 2 мл 1,5% раствора Н2О2 и 2 мл 2,5% раствора пирогалола.

Соединить колбу с прибором, открыть зажим и перемещением груши установить уровень воды в бюретке на 0, затем закрыть зажим.

Перевернуть пробирку в колбе так, чтобы Н202 попала на навеску и, встряхивая колбу, отмечать каждую минуту уровень воды в бюретке (он снижается за счет давления кислорода). Во время отсчета уровень воды в груше и бюретке выравнивают. Определение проводят в течение 15 мин с интервалом в 3 мин.

Опыт проводится по изложенной выше методике.

Прибор для газометрического определения каталазы

Результаты опыта можно выразить в см3 02/100 г растительной ткани/ 15мин. и занести в таблицу:

Виды растений

Навеска, г

Объем выделившегося кислорода (мл) в течение

Активность пе- роксидазы

3 мин.

6 мин.

9 мин.

12 мин.

15 мин.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Оборудование и реактивы

Оборудование и реактивы:

Ступки, растительное сырье (картофель, морковь и др.), прибор для определения активности каталазы (каталазник), СаСОз, 3%-ный раствор Hj02.

Вопросы для повторения:

  • Какими методами определяется активность пероксидазы?

Определение содержания аскорбиновой кислоты в растениях.

Аскорбиновая кислота (витамин С) и глутатион широко распространены в растениях. Они являются дополнительной окислительной системой в растении.

Аскорбиновая кислота - неустойчивое соединение, способное к обратимому окислению и восстановлению под действием фермента аскорбатоксидазы (Е). Это медьсодержащий белок (0,24% меди).

Аскорбиновая кислота

1 лутатион представляет трипептид, состоящий из остатков глутаминовой кислоты, цистеина и гликокола.

Аскорбиновая кислота и глутатион - сильные восстановители, и их окислительно-восстановительные превращения в растениях осуществляются совместно.

Место аскорбиновой кислоты в ЭТЦ дыхания

Место аскорбиновой кислоты в ЭТЦ дыхания

Организм человека не способен синтезировать витамин С и обязательно должен получать его с пищей.

Ход работы

Свежий растительный материал растирают в ступке до извлечения сока.

В присутствии крахмала йод дает характерное синее окрашивание. Аскорбиновая кислота восстанавливает йод, и если ее достаточно, то раствор обесцвечивается.

  • а) Набираем в первую колбу реактивы, указанные в таблице, раздел 1, колба 1. Если при добавлении 5-10 капель исследуемого сока содержимое колбы не обесцветилось, количество аскорбиновой кислоты меньше 5 мг%. Если же содержимое обесцветилось, количество аскорбиновой кислоты больше 5 мг%.
  • б) Набираем во вторую колбу реактивы, указанные в таблице, раздел 1, колба 2. Если при добавлении 5-10 капель исследуемого сока содержимое колбы не обесцветилось, количество аскорбиновой кислоты составляет 5-10 мг%. Если же содержимое обесцветилось, количество аскорбиновой кислоты больше 10 мг%.
  • в) Набираем в третью колбу реактивы, указанные в таблице, раздел 1, колба 3. Если при добавлении 5-10 капель исследуемого сока содержимое колбы не обесцветилось, количество аскорбиновой кислоты составляет 10-20 мг%.

Если же содержимое обесцветилось, количество аскорбиновой кислоты больше 20 мг%.

  • г) Набираем в четвертую колбу реактивы, указанные в таблице, раздел 1, колба 4. Если при добавлении 5-10 капель исследуемого сока содержимое колбы не обесцветилось, количество аскорбиновой кислоты составляет 20-30 мг%. Если же содержимое обесцветилось, количество аскорбиновой кислоты больше 30 мг%.

Далее определение аскорбиновой кислоты проводим аналогичным образом, используя разделы II и III таблицы.

Таблица 1

Раздел

№ колбы

Аскорбиновая кислота, мг%

CuSCV 5Н20 0.046%

KI 1%

Крахмал 0,15%

I

1

5

1

1

4

 

2

10

2

2

4

 

3

20

4

4

4

 

4

30

6

6

4

 

 

 

Аскорби

 

 

 

Раз

новая

CuS04*5H20

KI

Крахмал

дел

колбы

кислота,

0,09%

2%

0,3%

 

 

мг%

 

 

 

П

1

10

1

1

4

 

2

20

2

2

4

 

3

40

4

4

4

 

4

60

6

6

4

 

Раз

№ колбы

Аскорбин. кислота, мг%

CuS04* 5Н20

KI

Крахмал 1,5%

н2о

дел

0,465%

10%

III

1

50

1

1

4

14

 

2

100

2

2

4

12

 

3

200

4

4

4

8

 

4

300

6

6

4

4

Обычно содержание аскорбиновой кислоты в растительных объектах составляет не более 40 мг%. Полученные результаты заносим в таблицу.

Вид растений

Содержание аскорбиновой кислоты

Выводы

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Оборудование и реактивы:

Колбы конические на 50 мл, пипетки с делениями на 10 мл, 5 мл, цилиндр мерный на 25 мл, ступки, главные пипетки, CuS04- 5Н20 0,096%, 0,09%, 0,465%, KI 1%, 2%, 10%, крахмал 0,15%, 0,3%, 1,5%.

Вопросы для повторения:

  • К какому классу ферментов относится каталаза, пероксидаза, аскорбатоксидаза?
  • Каким свойством обладают эти ферменты?

Похожие статьи:

Добавить статью в закладки

 
Добавить комментарий


Защитный код
Обновить

Полное или частичное копирование материалов сайта разрешается только при указании активной ссылки на экологический портал!
Материалы размещены и подготовлены для образовательных и некоммерческих целей.
ООО "Новая Экология" © 2010 - 2017